ATCC細胞在培養瓶是怎么培養的？

　　某些ATCC細胞，是在培養瓶中以活細胞的形式運輸的。這些培養瓶中會接種細胞，孵育并保證細胞能生長，然后補充滿培養基后再運輸。

　　在收到培養瓶后，目視檢查培養基是否污染。包括異常的pH變化（苯酚紅變為黃色或紫色），渾濁度，或有無顆粒。在低倍率（100×）的倒置顯微鏡下觀察培養基中是否有微生物污染以及細胞的形態。

　　如果細胞是單層貼壁生長：

　　1.無菌操作，取出大約5至10ml的運輸培養基。運輸培養基可以保存在4℃備用。

　　2.將培養瓶放在產品說明書中推薦的溫度和CO2濃度下培養（大多數細胞系為37℃與5%CO2）直到細胞可以傳代培養。

　　如果細胞不貼壁或是懸浮狀態生長：

　　1.在無菌條件下，將培養瓶的全部內容物轉移到離心管中。

　　2.在125×g轉速下離心5～10 min。

　　3.取出大約10 ml運輸培養基的上清液，并重懸細胞。將取出的運輸培養基儲存在4℃備用。

　　4.無菌條件下，轉移懸浮細胞到25 cm2或75 cm2的培養瓶中，培養瓶大小取決于細胞株（見產品說明書）。

　　5.按照產品說明書中推薦的溫度和CO2濃度培養細胞，直到細胞可以傳代培養。

　　原代ATCC細胞來源于一塊碎的或酶消化的組織。原代培養物，是多種類型細胞的混合物，保留了其來源組織的特點。

　　一段時間后，原代培養的細胞會達到融合狀態，即在培養瓶中的所有可用空間由于細胞擴增都被覆蓋。在此之后，ATCC細胞需要消化（通常用蛋白水解酶，如胰蛋白酶）為單個細胞并且傳代（分裂，傳代或轉移）。在*次傳代以后，培養物通常被稱為一個細胞系。每一次傳代培養，細胞群體由于快速生長的細胞占主導地位而變得更均勻。具有所需特性的細胞也可以通過克隆，從培養物中選出。

　　二倍體細胞很少可以倍增超過幾代。它們只有有限的復制能力，并且在細胞倍增20至80次后開始減緩并zui終停止分裂。zui近的證據表明，某些細胞中觀察到的細胞衰老與預計的復制性衰老不同，可能是由于不適當的培養條件導致的。還有其他數據顯示，對某些物種的細胞系（尤其是人源的）即使生長在改進的培養條件下仍存在復制衰老。這種衰老是由細胞分裂時染色體末端（端粒）縮短調控的。

　　相反，傳代（或永生化）細胞具有無限增殖能力。這些細胞系通過多種手段中的其中一種來使細胞永生化或轉化。許多傳代細胞來自腫瘤組織。ATCC收集的大部分細胞系是傳代的，只有少數如CCD-1117Sk人皮膚成纖維細胞（ATCC CRL-2465?）或CCD-18Co人結腸細胞（ATCC CRL-1459?）是有限傳代的。更多關于ATCC細胞永生化的信息可以在ATCC上查找。

　　正如以上提到的，細胞系要么在培養瓶表面貼壁生長（錨定依賴性）要么懸浮生長（非錨定依賴性）。ATCC細胞的生長和分裂，通常遵循一個由四個階段組成的特征性增長模式：停滯期，對數期（指數期），平穩期（平臺期）和衰退期。

　　停滯期——將細胞接種至培養瓶之后，細胞逐步恢復的同時，緩慢生長。

　　對數期（指數期）——細胞進入一個對數生長的時期，一直持續到整個生長表面被占滿或細胞密度超過培養基提供營養的能力。

　　平穩期——細胞增殖減慢或停止。

　　衰退期——如果不更換培養基且細胞數量不減少，細胞活力會下降，并出現細胞死亡。

　　為了確保ATCC細胞活力，遺傳穩定性和表型穩定，必須使細胞保持在對數期。這意味著細胞需要在進入平穩增長階段之前，或在單層細胞長成100%融合之前，或在懸浮細胞達到推薦的zui大細胞密度之前定期進行傳代培養。為每個細胞系繪制生長曲線，對于測定該細胞系的生長特性是必要的。